Эксперименты на лабораторных животных являются неотъемлемой частью биомедицинских исследований, однако необходимо понимать, что любые выполняемые процедуры связаны с дискомфортом, стрессом или болью для животного, поэтому при их содержании и составлении плана исследования необходимо руководствоваться гуманными соображениями. В настоящий момент невозможно отказаться от проведения экспериментов на живых организмах, поэтому во всем мире правила работы с лабораторными животными постоянно обновляются и дополняются для того, чтобы минимизировать их страдания.
Нормативно-правовые документы. В настоящее время работу с лабораторными животными в Российской Федерации регламентируют следующие документы.
- Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 01.04.2016 № 199н «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики».
- Санитарно-эпидемиологические правила СП 2.2.1.3218-14 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)».
- Рекомендательные документы РД-АПК 3.10.07.02-09 «Методические рекомендации по содержанию лабораторных животных в вивариях научно-исследовательских институтов и учебных заведений».
- ГОСТ 33215-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур».
- ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами».
- ГОСТ 33217-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными хищными млекопитающими».
- ГОСТ 33218-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за нечеловекообразными приматами».
- ГОСТ 33219-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за рыбами, амфибиями и рептилиями».
Важными международными документами, регулирующими практику работы с лабораторными животными, являются директива 2010/63/EU Европейского парламента и совета Европейского союза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях, и указания Федерации европейских научных ассоциаций по лабораторным животным (Federation of European Laboratory Animals Science Associations), представленные на сайте организации. Также для проведения экспериментов зачастую необходимо разрешение от локальной комиссии по биоэтике.
Правило трех R. Помимо четкого следования рекомендациям в вышеперечисленных документах, для обеспечения минимизации страданий животных при составлении плана будущего исследования необходимо следовать правилу трех R.
Replacement — замена в опыте высокоорганизованных животных менее развитыми объектами или альтернативными методами. Существует журнал “Alternatives To Laboratory Animals”, предназначенный для освещения всех аспектов разработки, валидации, внедрения и использования альтернатив лабораторным животным в биомедицинских исследованиях и тестах на токсичность.
Reduction — достижение воспроизводимых результатов с использованием минимального количества животных. Это достигается как подбором методов исследования, при которых вариабельность полученных данных будет минимальной, так и использованием правильных статистических критериев с предварительным расчетом их мощности.
Refinement — улучшение условий содержания лабораторных животных, уменьшение дистресса животных во время экспериментов, в том числе использование анальгезии и обеспечение гуманной эвтаназии. Ответственность за соблюдение этого правила в первую очередь лежит на экспериментаторе, что приводит к возникновению четвертой R — Responsibility.
Классификация лабораторных животных. Важно понимать, что лабораторные животные разных видов не могут содержаться в одном помещении и должны находиться за пределами видимости, слышимости или распространения запахов друг друга. За несколько дней до посещения вивария не рекомендуются посещение других вивариев или близкий контакт с домашними животными того же вида или являющихся естественными врагами. Более того, крайне нежелательно работать с разными видами животных в один день.
По носительству ряда патогенных и условно-патогенных микроорганизмов лабораторных животных разделяют на категории.
- Конвенциональные, CV — носители различных неизвестных микроорганизмов.
- Улучшенные конвенциональные, MD — носители различных неизвестных микроорганизмов, но получены скрещиванием от более высоких (ниже по списку) категорий.
- Свободные от патогенной флоры, SPF — свободны от одного или нескольких специфических патогенных микроорганизмов.
- Безмикробные, GF — свободны от любых известных микроорганизмов.
- Гнотобиотные, GFX — все микроорганизмы известны.
Животные различных категорий не могут содержаться в одном помещении, а для доступа к стерильным животным обязательна обработка в санитарном блоке и зачастую требуется специальное разрешение.
Содержание животных. Лабораторные животные содержатся в специализированных клетках со свободным доступом к корму и воде (если иного не требуют условия эксперимента) и регулируемым искусственным освещением (12 ч — день, 12 ч — ночь). Если протоколом эксперимента подразумевается работа с животными в темное время суток, допустимо использование инфракрасного света.
Мыши и крысы являются социальными животными, поэтому не должны содержаться поодиночке. Однако, если того требует эксперимент, допускается отсадка животного в отдельную клетку с прозрачными стенками, так, чтобы оно могло видеть своих сородичей. Также рекомендуется отсаживать самку, готовую к родам, и рассаживать взрослых самцов, не выросших вместе. При этом в одной клетке не может находиться очень много животных: в ГОСТ 33216—2014 прописана минимальная площадь, которая должна приходиться на одну крысу или мышь.
Важным для благосостояния животных является обогащение среды их обитания. Для мышей и крыс в связи с их естественным образом жизни необходима возможность строить гнезда, то есть животное должно быть обеспечено строительным материалом. Большинство грызунов склонны к зонированию клетки (если животные этого не делают, вероятно, плотность их содержания слишком большая), поэтому им важно предоставлять и материал для создания физического барьера между зонами, а также для усложнения среды. Для этого могут подойти картонные трубы или коробки.